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我国科学家拓荒新型蛋白质相互作用标记技术

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图. PUP-IT系统标记蛋白质相互作用原理示意图

  正在国家自然科学基金项目(项目编号:31570767、31670919)等资助下,上海科技大学庄敏/王皞鹏课题组合作拓荒出一种新型相近分子标记技术,研究成果以“A Proximity-Tagging System to Identify Membrane Protein-Protein Interactions”(核定膜蛋白相互作用的相近标记系统)为题,于2018年8月13日在线公布于国际着名期刊Nature Methods(《自然•技术》)。论文链接:https://www.nature.com/articles/s41592-018-0100-5。,亚洲偷偷自拍高清无码_视频大全_高清在线观看

  细胞内的各种重大心思活动、细胞对外界状况的反响反应,皆以蛋白质之间的相互作用为纽带,组成重大旗子暗记转导网络系统。蛋白质相互作用包含组成较稳定的蛋白质复合物或瞬时相互作用两类。一些蛋白质之间的瞬时相互作用有重要的生理功能,但是由于对比细小,常规方法难以检测。近年来,相近标记技术正在被逐渐应用到蛋白质相互作用的钻研中。其原理是正在已知卵白上领悟一个具有相近标记服从的酶,经过历程酶介导的蛋白质共价修饰将与已知卵白相互作用的卵白标记上生物素,从而使正本不容易被检测的相互作用卵白被发现和核定。但是如今相近标记技术常用的两个酶都有比较大的局限性:BioID方法应用的biotin ligase(生物素连接酶)突变体的活性不敷下,而APEX方法应用的peroxidase(过氧化酶)需求正在反响反应体系里增添过氧化氢。

  庄敏和王皞鹏课题组合作拓荒了一种不同于BioID和APEX的新型邻近标记技术,命名为PUP-IT (Pupylation-based interaction tagging)。PUP-IT运用了细菌中的Pup连接酶PafA,经过历程将邻近卵白标记上小分子卵白Pup去实现对蛋白质相互作用的捕捉。Pup系统不但能对相近卵白住手标记,而且能够大概捕捉到蛋白质之间细小的相互作用。他们将PUP-IT系统应用到T细胞里面受体CD28的钻研中,核定到了多个已知与CD28相互作用的卵白,并且发清楚明了大量隐蔽的已报导的CD28相互作用卵白。

与BioID和APEX等传统的相近标记技术相比,PUP-IT技术有一定的下风。首先,PUP技术的底物分子不容易从酶上脱落,从而降低了标记的配景噪声;其余由于PUP-IT的底物是小分子卵白,因此更随意马虎被应用到组织或动物上,于正在体水平(in vivo)核定和检测蛋白质相互作用。


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