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Cell Death & Differentiation连发两篇circRNA相关钻研论文,2017最新自拍露脸国产,2017最新在线国产自拍

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日,Nature子刊 Cell Death & Differentiation前后在线公布了两篇circRNA相关钻研论文:

 

本篇文章的通讯作者是青岛大学转化医学院发育心脏病学中心主任王昆教授,引见发现心肌缺血再灌注模型中一种自噬相关circRNA(ACR)能够大概经过历程结合Dnmt3b遏止Pink1基因的甲基化,增长Pink1的表达,Pink1可增长FAM65B的磷酸化并遏止自噬的进程,正在心肌缺血再灌注损伤进程中珍重细胞[1]。

 

本篇文章的通讯作者是华中科技大学同济医学院附属协和医院童强松和郑丽端。本文引见AGO2基因内含子来源的circRNA(circAGO2)可结合HuR并增长其正在靶基因3’UTR富集,阻止AGO2复合物结合,增长了靶基因的稳定性,增长肿瘤进程[2]。 

上面让我们告别学习一下两篇文章的故事吧:

ACR 加入自噬调控 

自噬是重要的细胞心思活动进程,circRNA取自噬的相干之前已有相关报导,包含东南大学姚红红教授告别于2017年8月份和12月份公布于Autophagy杂志的两篇文章,告别引见了circHIPK2/miR-124-2HG/SIGMAR1轴经过历程调控自噬和ER Stress通路调控星形胶质细胞活化作用[3],circRNA HECW2/miR-30D调控ATG5和Notch1通路[4]。正在本篇文章中,作者经过历程芯片法理会了心肌缺血再灌注(I/R)后小鼠心肌circRNA表达差异,发现mmu_circRNA_006636正在I/R后显着下调,作者将其命名为自噬相关circRNA(Autophagy related circular RNA, ACR)

进一步,作者经过历程RNase R措置责罚前后QPCR证明ACR的环形组织,过表达ACR等执行证明ACR过表达可抑制细胞自噬进程。

1 ACR与细胞自噬有关 (引自[1])

 

缺氧/复氧(A/R)措置责罚后ACR的表达会显着着落,过表达ACR后A/R措置责罚以致的LC3聚集斑点有所减少,LC3-II也比对照组有所着落,说明过表达ACR可抑制自噬进程。电子显微镜理会后也注解过表达ACR后由A/R措置责罚诱惑的自噬小泡数量减少。

 

2 过表达ACR遏止自噬 (引自[1])

 

敲低ACR后住手转录组芯片理会,探讨与ACR相关的下游通路分子。结果注解正在敲降ACR后,Pink1和Irgm1显着着落,QPCR和Western也考据了那一改变。但过表达ACR后Pink1增加的非常隐着,Irgm1改变不明显。因此将ACR相关的通路锁定正在对Pink1的调控做用上。

3 ACR调控分子理会 (引自[1])

 

作者发现Pink1的启动子存在CpG甲基化区域,因此困惑Pink1的表达是经过历程启动子甲基化状态调控的。DNA甲基化抑制剂5-Aza措置责罚后能显着增加Pink1的表达,进一步左证了这个机制。经过历程抗Dnmt1,Dnmt3a,Dnmt3b的抗体告别RIP执行,注解只要Dnmt3b能够大概富集ACR。靶向ACR的探针Pull-down也能够大概特异性富集Dnmt3b。敲降ACR后Pull-down执行中Dnmt3b的富集减弱。Dnmt3b是否是可以或许靶向Pink1的启动子并调控其表达呢?经过历程ChIP执行证明,Dnmt3b可以或许靶向结合Pink1的启动子,敲降ACR后结合变强。干扰Dnmt3b能够大概增加Pink1卵白水平。A/R和I/R措置责罚后靶向Pink1的Dnmt3b显着增添。这些执行注解ACR经过历程结合Dnmt3b,遏止其与Pink1启动子的结合。

4 ACR经过历程Dnmt3b调控Pink1启动子甲基化状态 (引自[1])

 

进一步,作者正在体外和体内证明了Pink1调控自噬通路。为了找到Pink1调控自噬进程的机制,作者运用CoIP后Western核定的方法证明Pink1与FAM65B相互作用。基于量谱分析和抗体考据,证明S46是Pink1靶向FAM65B的位点

5 Pink1靶向调控FAM65B的磷酸化 (引自[1])

 

本文的事变对比细致松懈,环环相扣,一步步证明了ACR与Dnmt3b相互作用,遏止后者结合Pink1的启动子。正在缺氧/复氧或心肌缺血再灌注条件下连结细胞内Pink1的水平,遏止自噬通路的过火激活。本文的机制属于竞争性结合卵白的“protein sponge”模型,值得广大同行学习警惕。

circAGO2加入RNA稳定性调控 

AGO2是RISC复合物中独一具有内切核酸酶活性的亚基因素,发现在多种肿瘤中展现异常下表达的状态。正在这篇文章中作者发清楚明了来自AGO2内含子的一种circRNA(circAGO2)能够大概结合HuR卵白,增长HuR正在靶基因的3’UTR富集,阻止AGO2的结合,调控靶基因的稳定性。

circBase数据库中AGO2基因来源的circRNA共有6种,正在胃癌AGS中能检测到其中的两种,其中一种(hsa_circ_0135889)正在前列腺癌和结肠癌和胃癌组织中显着高于癌旁组织,将其命名为circAGO2。Sanger测序核定其序列,FISH理会亚细胞定位注解circAGO2主要定位于细胞质中。常见的细胞系中住手Northern执行注解正在肿瘤细胞中存在隐着的circAGO2下表达,其分子量也与预期一致。

6 circAGO2核定 (引自[2633PORN-亚洲香蕉视频在线播放 亚洲 西欧 中文 日韩 亚洲第一狼人综合网站 亚洲 小说 西欧 另类

 

MKN-5细胞中过表达及AGS中干扰circAGO2注解circAGO2的表达与细胞侵袭隐着相关。皮下成瘤执行也注解下表达circAGO2后MKN-5成瘤增强,干扰circAGO2后AGS细胞成瘤减弱。尾静脉注射两种细胞也证明circAGO2表达与肿瘤迁移密切有关。

7  circAGO2增长肿瘤迁移 (引自[2])

 

Pull-down执行理会与circAGO2互做的卵白分子,量谱分析找到767种circAGO2互做的卵白分子,结合数据库检索RBP卵白及已知的AGO2结合卵白,锁定了四种隐蔽的互做卵白:TARDBP, RPL27A,RBM4和HuR。但进一步的Pull-down考据注解只要HuR能够大概特异性的正在circAGO2探针捕获分子中富集。电泳迁移率窜改理会(EMSA),GST领悟标签Pull-down, FISH共定位理会也证明了circAGO2与HuR相互作用。

8 circAGO2与HuR相互作用理会 (引自[2])

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CoIP执行证明HuR与AGO2有相互作用。过表达和干扰circAGO2后转录组分析结合CLIPdb数据库的信息,注解有132种基因3’UTR存在AU-rich的序列(ARE)。miRWalk器械理会了这些ARE周围的结合miRNA,RIP理会注解HuR与AGO2皆可取这些基因的3’UTR结合,过表达circAGO2增长HuR与靶基因的结合,但同时会遏止AGO2的结合。结合干扰HuR,过表达miRNAs。正在多种细胞中考据了那一现象。

9 circAGO2调控HuR与AGO2的服从 (引自[2])

 

作者借进一步理会了稳定干扰circAGO2对成瘤才气的影响。基于HuR与circAGO2相互作用的分子模拟,假想了可阻断该相互作用的小肽HIP-13,执行注解该多肽能有效竞争性结合内源circAGO2,停滞其与HuR的结合并遏止肿瘤迁移作用。

本文的故事薄弱了我们对AGO2调控靶基因的机制的熟习,也证明了circRNA是一类重要的服从分子,对探讨circRNA的机制和服从供给了很有价值的警惕。

 

参考文献:

1. Lu-Yu Zhou, M.Z., Yan Huang, Sheng Xu,  Tao An,  Yun-Hong Wang,  Rong-Cheng Zhang, Cui-Yun Liu,  Yan-Han Dong,  Man Wang,  Li-Li Qian,  Murugavel Ponnusamy,  Yu-Hui Zhang,  Jian Zhang, Kun Wang, ,633PORN-亚洲香蕉视频在线播放 亚洲 西欧 中文 日韩 亚洲第一狼人综合网站 亚洲 小说 西欧 另类The circular RNA ACR attenuates myocardial ischemia/reperfusion injury by suppressing autophagy via modulation of the Pink1/FAM65B pathway. Cell Death & Differentiation, 2018.

2. Yajun Chen, F.Y., Erhu Fang, Wenjing Xiao, Hong Mei, Huanhuan Li, Dan Li, Huajie Song, Jianqun Wang, Mei Hong, Xiaojing Wang, Kai Huang, Liduan Zheng, Qiangsong Tong, Circular RNA circAGO2 drives cancer progression through facilitating HuR-repressed functions of AGO2-miRNA complexes. Cell Death & Differentiation, 2018.

3. Huang, R., et al., Circular RNA HIPK2 regulates astrocyte activation via cooperation of autophagy and ER stress by targeting MIR124-2HG. Autophagy, 2017: p. 0.

4. Yang, L., et al., Engagement of circular RNA HECW2 in the nonautophagic role of ATG5 implicated in the endothelial-mesenchymal transition. Autophagy, 2017: p. 1-70.

 


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